A tömegspektrometria előnye savas és amfoter kis és makromolekulák vizes és nemvizes közegű elektroforetikus analízisében

Abstract

A kapilláris elektroforézis (CE) egy modern, sokoldalú analitikai technika, amelyet pozitívan töltött, negatívan töltött és töltés nélküli vegyületek elválasztására használnak, akár ugyanabban a mérésben is. A tömegspektrometria (MS) a CE egyik detektálási módja is lehet. A CE és az MS kapcsolása igen hatékony analitikai eszközt eredményez, mivel kombinálja a kiemelkedő detektálási érzékenységet, a szerkezeti információk nyújtásának képességét és a CE magas elválasztási hatékonyságát. A kapilláris elektroforézis képes elkerülni a szerves oldószerek használatát. A nemvizes kapilláris elektroforézis (NACE) akkor kerül szóba, ha az adott vizsgálandó vegyület nem vagy nehezen oldódik vizes oldószerekben, pufferben és felületaktív anyagokban. Munkánk során Agilent 7100 kapilláris elekrtoforézis készülékkel és Agilent 6530 Q-TOF LC-MS rendszerrel dolgoztunk. A két készülék összekapcsolása egy Agilent Jet Stream ESI interfészen keresztül történt. Méréseink során egyrészt sikerült olyan CE-MS módszert kidolgozni, ami alkalmas hat különböző szerves sav (tejsav, borostyánkősav, almasav, borkősav, sikimisav és a citromsav) azonosítására és emellett a szerves savak koncentrációjának meghatározására vörösbor mintából. Másrészt egy fehérjekeverék (lizozim, citokróm C, mioglobin, β-laktoglobulin A) elválasztását is megvalósítottuk szintén vizes közegben izoelektromos fókuszálással. Ekkor a CE-MS kísérleteink során, szekvenciális injektálási protokoll alkalmazása mellett megvizsgáltuk az amfolit oldatok minőségének, pH tartományának, koncentrációjának, valamint az injektált zónák hosszának hatását a fehérjék elválasztására. Harmadrészt sikerült nemvizes közegben lipid A komponenseket is elválasztanunk. Ekkor, a NACE-MS mérések során, változtattuk az elektrolit oldat oldószerösszetételét és koncentrációját abból a célból, hogy mit okoz ez a vizsgált lipid A komponensek migrációs idejére, az elválasztás hatékonyságára és a felbontásra. A lipid A molekulákat pozitív és negatív ionizációs módokban fragmentációs mintázatukon keresztül is azonosítottuk.